Анализ на хеликобактер пилори. Определение антигена HELICOBACTER PYLORI в кале (ИФА) Кал на хеликобактер хеликс

[09-053 ] Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

1025 руб.

Заказать

Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.

Синонимы русские

Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA .

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, кал.

Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.

H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.

Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.

На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.

Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.

Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:

атрофического или антрального гастрита;
язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

текущая H. pylori-инфекция;
H. pylori-инфекция в анамнезе.

Отрицательный результат:

отсутствие H. pylori-инфекции.

Что может влиять на результат?

Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Важные замечания

Бактерия Helicobacter pylori приводит к развитию неприятных ощущений и дискомфорту. Обитает она в отделе кишечника, расположенном между желудком и 12-перстной кишкой. Сами по себе бактерии не выживают на воздухе. Если количество бактерий становится очень большим, развивается заболевание хеликобактериоз. При нем могут появиться , гастриты, .

На наличие бактерии может происходить разными способами. Одним из самых эффективных является исследование кала.

Способы анализа кала на Хеликобактер пилори

Есть несколько основных способов:

метод ПЦР;
культуральный анализ;
иммунологический.

Метод ПЦР

Это разновидность молекулярно-генетической диагностики, позволяющий выявить бактерию даже при небольшом количестве в биоматериале фрагментов ДНК. Особенность метода заключается в многократном умножении анализируемого образца возбудителя болезни.

Для проведения исследования требуется особое сочетание, которые получается за счет искусственного синтеза фрагментов ДНК. Во время такой манипуляции происходит наращивание цепочки ДНК, если бактерия присутствует в организме.

Во время исследования соблюдаются определенные температурные режимы, кислотность. Для ускорения реакции осуществляется несколько десятков циклов.

Культуральный

По сути, это бактериологический посев. Во время исследования биологический материал помещается в особую среду. После определенного количества времени ее изучают под микроскопом.

Чтобы определить бактерию, используют специальные техники окрашивания.

При необходимости возможно провести тест на выявление действия антибиотиков на Хеликобактер пилори.

Это положительно сказывается на скорости выздоровления и эффективности проводимой терапии.

Иммунологический

При появлении возбудителя в организме активно начинают вырабатываться антитела. Анализ позволяет выявить их наличие в биоматериале за счет возможности слипания с антигенами. Во время исследования антитела с метками соединяются с анализируемым образцом кала.

Особенность этого метода заключается в возможности получения ложноположительного результата. Поэтому его назначают до проведения инструментальных методов исследования.

Показания

Исследование кала проводится при:

и язвах желудка,
атрофии слизистых оболочек.

Техника выполняется и для изучения эффективности контроля назначенных антибактериальных препаратах. Все эти показания являются прямыми к проведению ПЦР.

Культуральный анализ чаще назначается для определения чувствительности патогенной микрофлоры к назначенному лечению. Поскольку этот метод более дорогой, результаты становятся известными через неделю, для выявления Хеликобактер пилори назначается не всегда.

Показаниями к иммунологическим методам являются признаки патологий ЖКТ, генетическая предрасположенность к , железодефицитная анемия и при инфицировании ближайшего окружения.

Каковы преимущества и недостатки молекулярной диагностики?

К достоинствам анализа ПЦР относится возможность прямого определения возбудителя.

Он позволяет уточнить наличие бактерии и ее количество. Отличается метод и высокой специфичностью, поскольку при анализе выявляется уникальный фрагмент ДНК.

К достоинствам относится:

высокая чувствительность;
хорошая скорость получения результата;
возможность использования техники у детей и беременных женщин.

Поскольку весь процесс анализа биоматериала автоматизирован, уменьшается вероятность человеческой ошибки в процессе исследования. Диагностическая ценность метода достаточно высокая.

Для проведения анализа не требуется проникновения или использования инвазивных методов. Процедура сбора биоматериала технически простая, не причиняет угрозы здоровью пациента.

К недостаткам относится тот факт, что отрицательный результат не исключает наличие в организме бактерии.

Поэтому результаты ПЦР не могут быть окончательными. Кроме этого, показатель чувствительности более низкий по сравнению с исследованием образца ткани и клеточной массы.

Подготовка

За трое суток до сбора биоматериала необходимо отменить прием антибиотиков, различных слабительных средств и ректальных свечей. Если сделать это невозможно, потребуется консультация доктора.

Сбор материала происходит в стерильную банку из стекла. Возможно использование пластиковых контейнеров, которые продаются в аптеке вместе со специальной ложечкой.

Доставить материал следует быстро в первые сутки после получения. Хранить тару до момента сдачи нужно при температуре в 3-9 градусов.

При проведении исследования для определения эффективности антибактериальной терапии, повторный анализ назначается примерно через 4 недели. На более ранних сроках он может показать недостоверный результат.

Где сдать?

Пройти можно как в частных лабораториях, так и в медицинских центрах, обычных поликлиниках. Стоимость услуги зависит от выбранной техники.

Лучше всего остановить свой выбор на лицензированных учреждениях. Тогда велика вероятность, что результат окажется достоверным, а само исследование биоматериала будет проведено по всем правилам.

Расшифровка результатов и показатели нормы

В цифрах результат анализа не дают. Он может быть отрицательным или положительным. Анализ предполагает качественную и количественную оценку бактерий в биоматериале. Есть 4 стадии роста бактерий:

Первая. В благоприятной среде рост бактерий осуществляется слабо, а в твердой – не выявляется.
Вторая. Размножение и рост микрофлоры доходит до 10 колоний.
Третья. Отличается прирост колоний до 100 в твердой среде.
Четвертая. Рост бактерий очень большой.

Последние две стадии говорят о серьезном воспалительном процессе. При этом наличие Хеликобактер пилори в кале не может прямо указывать на какое-то заболевание.

Цена

Дороже всего будет стоить ПЦР с генотипированием, простой ПЦР обойдется в два раза дешевле (около 600 рублей). Остальные анализы обойдутся в 400-800 рублей.

После проведения анализа результаты следует показать врачу общей практики или гастроэнтерологу. Они смогут назначить правильное лечение, при необходимости определят чувствительность бактерии к различным видам антибиотиков.

Исследование используется для определения антигенов H. pylori в образцах кала методом иммунохроматографии с целью диагностики инфекции H. pylori.

Тест рекомендован многочисленными международными консенсусами, высокоинформативный метод, является ”золотым стандартом” в диагностике хеликобактериоза, используется для первичной диагностики и для контроля за проведенной антихеликобактерной терапией.

Одним из самых перспективных неинвазивных методов подтверждения хеликобактерной инфекции (являющейся в т.ч. фактором риска различных онкозаболеваний желудочно-кишечного тракта и др.) считается определение антигенов возбудителя в кале. Метод высокочувствительный и специфичный (около 90 %), малоинвазивен, прост в применении. Применение теста особенно удобно в педиатрии.

Преимущества метода:

1. Неинвазивный метод (диагностика без использования фиброгастроскопии).

2. Детекция как активных, так и кокковых форм бактерии.

3. Высокая точность, чувствительность и специфичность (до 95-98%).

4. Длительное хранение образцов без потери информативности, а так же возможность транспортировки.

5. Метод рекомендован 3-я международными (Маастрихтскими) соглашениями по диагностики и лечению хеликобактериоза, российской гастроэнтерологической ассоциацией и российской группой по изучению Helicobacter pylori как наиболее точный и удобный для пациента.

6. Используется у взрослых и детей.

7. Не требуется предварительной подготовки.

Бактерии вида Helicobаcter pylori являются причиной возникновения большинства гастритов, до 80% случаев язвенной болезни желудка и до 90% язвенной болезни двенадцатиперстной кишки. Считается, что во всем мире инфицировано более половины населения, а в России - более 80% жителей.

Хеликобактериоз – это широко распространенное инфекционное заболевание с оральным, фекально-оральным и контактным путем передачи возбудителя, сопровождающееся преимущественным поражением антрального отдела желудка, двенадцатиперстной кишки. Источником инфекции является больной человек или бактерионоситель, а наиболее чувствительны к ней люди с иммунодефицитами. Инкубационный период составляет около семи дней.

Возбудителем инфекции является Helicobacter pylori – спиралевидная грамотрицательная бактерия, способная инфицировать желудок и двенадцатиперстную кишку. Helicobacter pylori вызывает лишь предрасположенность к гастриту и язвенной болезни, и только при дополнительных факторах – группе крови О(I), наследственной предрасположенности, курении, злоупотреблении алкоголем, приеме ульцерогенных лекарственных препаратов, частых стрессах, неполноценном питании – возникает язвенный дефект.

В настоящее время доказано, что хеликобактерная инфекция повышает риск рака желудка. Более половины населения в мире являются носителями Helicobacter pylori, однако у большинства носителей нет никаких симптомов, и лишь примерно у 15 % из них возникает гастрит или язвенная болезнь.

Правила подготовки к исследованию:

Не требуется предварительной подготовки.

Анализ кала на хеликобактер пилори – это достоверное доказательство наличия в организме человека бактерии, вызывающей язвенную и множество других болезней пищеварительного тракта человека. Такой анализ является прямым доказательством, если обнаруживается либо сам хеликобактер, либо его ДНК. Достоверность анализа самая высокая изо всех известных.

От правильности подготовки и сбора материала зависит результат. Присутствия человека не требуется, достаточно вовремя доставить правильно собранный материал.

Подготовка к сдаче анализа

При подготовке нужно неукоснительно соблюдать такие правила:

Для подготовки достаточно 3-х дней. В это время желательно отказаться от всех лекарств (если сделать этого нельзя, сообщить врачу названия и дозировку). Нужно сократить употребление рыбы и мяса, готовить их на пару или варить. Лучшая еда на это время – каши и кисломолочные продукты, овощные и фруктовые пюре, слабые супы, нейтральные натуральные соки (яблочный, белый виноградный), компоты, морсы, слабый чай, отвар шиповника.

Подготовка тары

Некоторые лаборатории выдают тару для анализа, включая их стоимость в общую цену. Это лучший вариант. Емкость для кала можно приобрести в аптеке, стоимость несколько рублей. Контейнер продается в стерильном состоянии, его нельзя открывать, протирать или промывать. К крышке прикреплена пластиковая ложечка, которой материал набирается.

В самом крайнем случае можно воспользоваться стеклянной банкой с хорошо подогнанной крышкой (из-под детского питания). Банку нужно хорошо вымыть, а затем прокипятить вместе с крышкой и ложкой или другим предметом, которым будет набираться кал. Если на посуде останутся бактерии, анализ окажется неверным.

Сбор материала

Собирать материал из унитаза или памперса нельзя. Унитаз нужно накрыть чистым полиэтиленовым пакетом, а вместо памперса (ребенку или лежачему больному) подстелить клеенку. Допускается забор материала из чистого горшка.

Контейнер заполняется не более чем на одну треть, плотно закрыть крышкой. К посуде прикрепить направление или написать на этикетке (разборчиво) фамилию и имя пациента, год рождения.

Как и сколько можно хранить материал?

Контейнер с материалом доставляется в лабораторию как можно раньше, оптимально в день забора. Если возможности срочной доставки нет, допускается хранение в холодильнике не более 2-х суток при температуре не выше +4 ° С. При необходимости более длительного хранения материал однократно замораживают при температуре -20 ° С.

Методики анализа и расшифровки показателей

Биологический материал можно исследовать разными способами.

Другие способы выявления хеликобактера

При обследовании используют обычно несколько методов, чтобы окончательно убедиться в наличии или отсутствии хеликобактера:

Набор диагностических тестов зависит от оснащенности лечебного учреждения. «Золотым стандартом» считается гистологическое исследование. Однако положительный результат хотя бы двух разных тестов считается достаточным для того, чтобы подтвердить присутствие бактерии.

Что делать при положительном анализе?

Как можно скорее посетить гастроэнтеролога, чтобы выяснить, нужно ли проводить эрадикацию (удаление из организма) бактерии. Это неоднозначный процесс, есть противопоказания, консультация врача необходима.

Диагностический анализ на выявление в организме микроорганизма Хеликобактер Пилори посредством проведения ПЦР распространен во всем мире. Для проведения анализа достаточно сдать кал, никаких инвазивных процедур не требуется (как, например, в случае с ФГДС методом диагностики).

Самыми серьезными минусами этой процедуры считают сравнительно низкую точность и неудобство в сдаче материала для анализа.

ПЦР анализ на наличие в желудочно-кишечном тракте бактерии Хеликобактер Пилори проводится практически во всех, как государственных, так и частных медицинских центрах, в которых имеется своя лаборатория. Назначение на проведение данного вида исследования можно получить у врача-терапевта, гастроэнтеролога и иммунолога.

Прохождение исследования по направлению актуально только для государственных медицинских учреждений. В частных центрах анализ можно проводить без направления, просто по собственному желанию.

Процедура это платная. Цена на ПЦР обследование может отличаться в зависимости от клиники и от города. Например, в Москве данное исследование стоит около 600 рублей, тогда как в регионах обойдется в 250-350 рублей. В частных клиниках, по данным на 2016 год, цена выше на 5-10%: в районе 650 рублей для столицы.

Насколько точен тест?

Современные исследования указывают на достаточно высокую точность ПЦР анализа кала на наличие бактерии Helicobacter Pylori. Чувствительность теста колеблется в диапазоне между 64-94%.

Некоторых пациентов может смутить столь большой разброс в чувствительности теста. Однако стоит понимать, что в медицине нет идеально точных диагностических методик, а показатель в 64-94% является более чем удовлетворительным. Для более точного диагноза следует сочетать этот метод с другими способами выявления Хеликобактер (анализ крови, дыхательный тест, и так далее).

Диагностика и лечение Хеликобактер (видео)

Преимущества и недостатки метода

К преимуществам ПЦР анализа кала относят:

Немалую чувствительность (точность) метода.
Не требуется инвазии (проникновения, как при ФГДС) для выполнения процедуры, а сама процедура технически очень проста.
Абсолютная безопасность для здоровья пациента.
Возможность обнаружения различных штаммов и форм бактерии Helicobacter Pylori.
Возможность с этой же пробы сразу провести анализы и на другие заболевания.

К недостаткам ПЦР анализа кала относят:

невозможность определения чувствительности к антибиотикам;
невозможность отличить прошедшую инвазию Хеликобактер Пилори от существующей;
сам метод доступен не в каждом медицинском центре.

Общее описание и виды метода

ПЦР тест на наличие в ЖКТ микроорганизма Helicobacter Pylori основан на молекулярно-генетическом анализе многократного умножения образца бактерии Хеликобактер Пилори. Стоит отметить, что для этого метода диагностики берется не кровь, а кал.

ПЦР анализ проводится с помощью двух способов:

культурального;
иммунологического.

При культуральном ПЦР анализе биологический материал кладут в чашку Петри, в которой заблаговременно создаются благоприятные условия для размножения Хеликобактер Пилори.

Через 5-7 дней проводится осмотр чаши и если в ней за этот срок развилась колония микроорганизма Helicobacter Pylori, то результат является положительным. К сожалению, на точность этого метода могут повлиять выпитые накануне антибиотики, о чем пациенты должны быть осведомлены.

При иммунологическом виде ПЦР анализа маркированные антитела помещают в анализируемый образец. В итоге, при наличии бактерии Хеликобактер Пилори, можно увидеть образование специфических комплексов антиген-антитело, что говорит о положительном результате анализа.

Подготовка и сдача анализа

За трое суток до проведения теста следует отменить прием антибиотиков, слабительных средств, ректальных свеч и замедляющих перистальтику лекарств. При невозможности отмены препаратов из списка (по жизненным показаниям) требуется консультация с врачом.

Сбор кала для анализа осуществляется исключительно в выданную в больнице или лично приобретенную специальную медицинскую тару (ее можно купить в любой аптеке).

Доставлять исследуемый биоматериал нужно как можно быстрее. При невозможности быстрой транспортировки следует хранить тару с биоматериалом при температуре в +3-9 градусов, но не более суток с момента сбора.

Важно: если анализ проводится повторно, после проведения антибактериальной терапии, тест нужно проводить не ранее четырех недель после окончания лечения. В иных случаях он будет неэффективен и покажет ложный результат.

Расшифровка и нормы

Расшифровка результатов для бактериологического метода ПЦР исследования:

количество микроорганизмов 0 - микроорганизм Хеликобактер Пилори не выделен (норма);
количество больше 0 - наличие хелибактериоза (подтверждается даже в том случае, если больной не имеет симптомы болезни), требуется лечение;
S - чувствительность к указанному в результате антибиотику;
R - резистентность (полная устойчивость) к указанному в результате антибиотику;
I - умеренная чувствительность к указанному в результате антибиотику.

Расшифровка результатов для иммунологического метода ПЦР исследования:

отрицательный результат - микроорганизм Helicobacter Pylori не выделен;
положительный результат - наличие хеликобактериоза, требуется лечение.